.0-5. ص. ص (2003) جوان عدد علـوم و تكنولوجيا Aspergillus fumigatus استخالص وتنقية المنتجات األيضية الثانوية لفطر ذات التأثير البيولوجي على بعض السالالت البكييرية من األوساط الغذائية المختلفة 0/0/5 تاريخ قبوله -2/2/2 تاريخ استالم البحث ملخص دهيمات. ل قسم البيولوجيا كلية علوم الطبيعة و الحياة جامعة منتوري الجزائر قسنطينة عطا هللا. م. م المركز الوطني للبحث مصر القاهر الدوخي مستخلص الخميرة أو مسحوق كل من (األرز يساهم بحثنا في اجاد أنسب بيئة تخمرية تعتمد على السكروز ( تحت ظروف ساكنة 20-25-30) C والتحضين على ph=6 الشعير والقمح) كمصادر للكربون والنيتروجين عند وكمية وفيرة من المنتجات األيضية A. Fumigatus النتاج كمية معتبرة من الكتلة الخلوية الحسن عزلة فطرية أظهر االختبار البيولوجي ثالث مجموعات من. الثانوية ذات التأثير البيولوجي على بعض سالالت بكتيريا االختبار.) شديدة الحساسية حساسة البكتيريا حسب حساسيتها للمنتجات األيضية الثانوية للفطر (مقاومة 2245 mg من مسحوق األرز بلغت الكتلة الخلوية 3g من بيئة التخمر المضاف لها 00ml أظهرت النتائج أن في من 4g أما البيئة المضاف لها.A. Fumigatus (0) من المنتجات األيضية الثانوية للعزلة الفطرية 8.6 mg و المنتجات. من المنتجات األيضية الثانوية للفطر 8.2 mg من الكتلة الخلوية و 2633mg مسحوق القمح سجلت بها ثم Al2O3 كروماتوجرافيا العمود (أوكسيد األلومنيوم األيضية الثانوية تمت تنقيتها بالمذيبات العضوية لكل البقع الناتجة بعد تجفيفها Rf (0.05-0.37) حددت قيم معامل السريان.) كروماتوجرافيا الطبقة الرقية. مركبات تتقارب في التركيب الكيمائي 2 والمحددة بعشرة. باسيليس فيوميقاتيس بيئات التخمر التأثير البيولوجي السالالت البكتيرية المنتجات األيضية : الكلمات المفتاحية Abstract Our research consists has determine the optimum media of fermentation (Czapeck-dox) containing of sucrose, enriched by yeast extracted or powder of (rice, barley or wheat) like source of carbon and nitrogen, to ph=6 test, after 4 days of fermentation stationary at (20,25,30) C to get a better biomass of Aspergillus fumigatus (0) and a level raised of secondary metabolites having an inhibitory effect on the bacteria test. The results of the bio essay tests gotten like follows: (Bacteria resistant, less resistance, Very sensitive ). In 00ml of fermentation medium enriched by 3g powder of rice. gave an important mass cellular 2245mg and 8.6 mg of the metabolites secondary d'a. fumigatus (0). The extraction and purification of the secondary metabolites has been achieved by different organic solvents, their separation is made by Thin Layer Chromatography (TLC) and Chromatography on Column (CC), this survey to permit the obtaining of 0 compounds according to their Rf (0.05-0.37). Keywords: Secondary metabolites, Bacteria s test, Bioassay, Fermentation, medium, Aspergillus fumigatus. Résumé Notre recherche consiste à déterminer le milieu optimum de fermentation (Czapeck-Dox) contenant de saccharose, enrichi par extrait de levure ou farine de( riz, orge ou blé) comme source de carbone et d azote, à ph=6 test, après 4 jours de fermentation stationnaire à(20,25,30)c pour obtenir une meilleur biomasse d Aspergillus fumigatus(0) et un niveau élevé de métabolites secondaires ayant un effet inhibiteur sur les bactéries. Les résultats des tests de bio essai obtenus comme suit : Bactéries résistantes, sensibles, très sensibles. Dans 00ml de milieu de fermentation enrichi par 3g de poudre du riz. a donné une importante masse cellulaire 2245mg et 8.6 mg du métabolites secondaires d'a. fumigatus (0). L extraction et purification des métabolites secondaires a été réalisé par différentes solvants organiques, leurs séparation est faites par chromatographie sur couche mince(ccm) et chromatographie sur colonne (CC), cette étude à permis l obtention de 0 composants selon leurs Rf (0.05-0.37). L. DEHIMAT Département de Biologie Faculté des Sciences Université Mentouri Constantine, Algérie M.M. ATALLA National Research Mots clés : Métabolites secondaires, Bactéries test, Bio-essai, Milieux de fermentation, Center, Dokhi Cairo, Egypt Aspergillus fumigatus. ) م نقطة تحول في تاريخ الطب 25-20( فانه من المؤكد اعتبار السنوات تاريخ المضادات الحيوية وأنتجت عددا كبيرا من. دورا بارزا في هذا المجال Actinomycètes لعبت األكتينوميستات. والميكروبيولوجيا كما أن المضادات الحيوية يمكن أن تنتـج.]25[ وفي تغذية الحيوانات المضادات الحيوية المهمة التي تستعمل في الطب بتتبع.2003 الجزائر قسنطينة جامعة منتوري
م ل. دهيمات م.م. عطا هللا Pseudomonas aerogenosa, Pseudomonas sp., Staphylococcus aureus, S. blanc, S. épidermis, من أنواع مختلفة لنفس الجنس الميكروبي ]5 0[. العديد من المنتجات األيضية الميكروبية ذات الفعل من مخبر علم األحياء الدقيقة المستشفى الجامعي ابن المضاد للبكتيريا تم استخالصها وتنقيتها لكن البعض منها باديس ومستشفى الكلى- قسنطينة. تم إدماجها ضمن المركبات الدوائية ]7[. يفرز فطر 3- البيئات الغذائية Aspergillus fumigatus العديد من المواد األيضية الثانوية.3- بيئات النمو الصلبة والسائلة في حالة توفر أوساط غذائية ذات مصادر كربونية وازوتية استخدمت بيئة :Czapeck-Dox تتم اذابة مكونات تحتوي على العناصر األزمة والضرورية لنمو وتطور البيئة: الفطر بصفة جيدة والتي قد يكون للبعض منا تأثيرا مبيدا أو NaNO 3 (2 g/l), MgSO 4 7H 2O (0.5 g/l), مثبطا لنمو األنواع البكتيرية ][. إن الدراسة المخبرية التي أجريناها مكنتنا من معرفة g/l), KCl 0.5) g/l), KH 2PO 4 ) FeSO 4,7H 2O (0.00 g/l), C 2H 22O (20 g/l), أنسب بيئة غذائية وكذا الظروف البيئية المحيطة بنمو الفطر 500ml من الماء المقطر مع التسخين والتحريك في حجم النتاج كمية معتبرة من الكتلة الخلوية لحسن عزلة فطرية.A الجيد, يكمل الحجم إلى 000 مل, يضبط ph البيئة عند (7-6) وتوزع في دوارق بحجم 250ml وتعقم في األتوكالف fumigatus وكمية وفيرة من المنتجات األيضية الثانوية ذات التأثير البيولوجي على بعض السالالت البكتيرية. تحت ضغط يقدر ب,5 ضغط جوي ودرجة حرارة 20 ذلك في الثالجة لحين 20 دقيقة. وتحفظ بعد لمدة الطرق والوسائل االستعمال.] 0 [ - عينة الفطر Aspergillus fumigatus نفس مكونات بيئة Czapeck -Dox السائلة مع اضافة تم الحصول على عزالت الفطر المستخدمة من مخبر األجار - اجار بمقدار.20g/L وتجدر اإلشارة أن هذا علم األحياء الدقيقة التطبيقية كلية العلوم قسم علوم الطبيعة األخير تتم اضافة بالتدرج لتجنب تكوره في الماء. تعقم والحياة- جامعة منتوري قسنطسنة. سبق عزله من حبوب البيئة في األتوكالف تحت نفس الشروط السابقة ]20[. النجيليات جدول )2(. وتم تعلريفها من طرف Dehimat) 0) وتأكد تعريفها من طرف Atalla و (*).Bretton نميت 2.3- بيئات التخمر :جهزت هذه البيئات بدءا من بيئة Czapeck -Dox السائلة وفق.]20[.2.3 بيئات التخمر المضاف إليها السكروز وزعت بيئة التخمر المحضرة سابقا في فالسكات سعتها العزلة الفطرية ألجراء الدراسات المختلفة المظهرية والمجهرية واستخالص منتجاتها األيضية الثانوية ][. 2- العزالت البكتيرية 250 ml بحجم 00 ml يضاف لكل منها تراكيز مختلفة من حصل على العزالت البكتيرية.g/L)5 0 2.5 2.5 5 ( السكروز Acenitobacter sp., Bacillus subtilus, pneumonia, 2.2.3 Escherichia coli, Klebsiella بيئات التخمر المضاف إليها مستخلص الخميرة 00 سكروز/ ml 4g يضاف لبيئة التخمر المضاف إليها Protus vulgaris,.p mirabilis, كبيئة قاعدية يضاف إليها تراكيز منطقة العزل المصدر العزالت الفطرية مختلفة من مستخلص الخميرة ) برج بوعراريج (8) fumigatus Aspergillusحمص مستورد )0( arietium Cicer.g/L)5 0.7 قسنطينة Triticum durum M BB)2( الصلب Aspergillusالقمح fumigatus () (00) fumigatus Aspergillusالقمح الصلب BD7)( Triticum durum قسنطينة 3.2.3 بيئات التخمر المضاف (0) fumigatus Aspergillusالقمح الصلب )0( Ch. Triticum durum قسنطينة (02) fumigatus Aspergillusالقمح اللين steros)2( Triticum vulgare NR قسنطينة إليها مسحوق األرز سطيف يضاف لبيئة التخمر المضاف Avoine avan )2( Aspergillusخرطال fumigatus (63) سطيف إليها 4g سكروز/ ml 00 كبيئة Avoine provisoire )( Aspergillusخرطال fumigatus (64) (65) fumigatus Aspergillusشعير )( tichidrette Hordeum vulgare سطيف قاعدية يضاف إليها تراكيز مختلفة جدول : عينات العزالت الفطرية Aspergillus fumigatus المعزولة من مصادر مختلفة من من مسحوق األرز ) 0 2. g/l)5 صوامع غالل الشرق الجزائري )برج بوعراريج سطيف وقسنطينة(. (*) A. Bretton, Faculté de Botanique, Université Clermont Ferrand II, France. 6
استخالص وتنقية المنتجات األيضية الثانوية لفطر Aspergillus fumigatus ذات التأثير البيولوجي على بعض السالالت البكييرية....2.6 االستخالص بالمذيبات العضوية : بعد انتهاء مدة التحضين يضاف لكل حوجلة حجم مماثل من الكلوروفورم 50 ml تقطع المزرعة الفطرية بالخالط الكهربائي مع التسخين على درجة حرارة 40 م ويرشح المستخلص خالل قطعة شاش أو موسلين يتم التخلص من الكلوروفورم وفق عملية التبخير تحت التفريغ من خالل سلفات الصوديوم الالمائى Anhydro - Sodium يذاب الراسب في 0 ml من (EA) Ethyl Acetate ويضاف إليه Oxalate de potassium N بحجم مماثل ويضبط ph المحلول عند 2 بالتنقيط بحمض (HCl) المركز. يجزأ المحلول ويفصل إلى طبقتين. يضاف إلى الطبقة الحامضية حجم مماثل من الكلوروفورم ويعدل ال (NaHCO (3 عند 0 بإضافة بكربونات الصوديوم ph )N( ويجزا المحلول ويفصل 3 مرات. يجمع مستخلص الكلوروفورم ويغسل بالماء المقطر )حجم / حجم( 3 مرات ويفصل. يبخر الكلوروفورم في جهاز التبخير تحت التفريغ Rotavapeur يجفف الراسب من خالل سلفات الصوديوم الصوديوم االمائي Anhydros. Sodium باستعمال جهاز التجفيف (Dessiccateur) للحصول على المنتجات األيضية الثانوية الخامة لفطر (0) fumigatus.a. 2.2.3 بيئات التخمر المضاف إليها مسحوق الشعير يضاف لبيئة التخمر المضاف إليها 4g سكروز/ 00 ml كبيئة قاعدية يضاف إليها تراكيز مختلفة من مسحوق الشعير ( g/l)5 0 2. 3.2.3 بيئات التخمر المضاف إليها مسحوق القمح يضاف لبيئة التخمر المضاف إليها 4g سكروز/ ml 00 كبيئة قاعدية يضاف إليها تراكيز مختلفة من مسحوق القمح. g/l)5 0 2 ( 2- الدراسة المظهرية والمجهرية لفطر.A fumigatus باالستعانة بقطرة من كاشف Lactophénol تمت الدراسة المجهرية ]22[. 3- االختبار البيولوجي للمنتجات األيضية الثانوية لفطر A. fumigatus اجرى االختبار البيولوجي باتباع طريقة أقراص من مستعمرات العزالت المختلفة لفطر.A fumigatus بقطر 5 mm تؤدي إلى إقاف نمو األنواع البكتيرية. توضع أقراص العزالت الفطرية على سطح األطباق بتري تحتوي على األجار المغذي (GN) يساعد على نمو مختلف األنواع البكتيرية بعد 2 ساعة من التحضين على 07 م يسجل متوسط قطر منطقة التثبيط أو التأثير لكل قرص ]6[. 6 إنتاج الكتلة الخلوية والمنتجات اليضية لعزالت فطر.A fumigatus.6 قياس الكتلة الخلوية إستخدمت العزالت الفطرية A. fumigatus (8,,00, 0, 63, 64, 65( لتقدير كفاءتها على إنتاج كمية معتبرة من الكتلة الحيوية في بيئات التخمر المختلفة من مزارع عمرها 7 أيام حيث حقنت بيئات التخمر بمعدل 0 6 جرثومة/. ml ثم التحضين على ) 0 ( م 5 تحت ظروف ساكنة لمدة 2 يوم. أجريت التجربة من مكررين بعد إنقضاء فترة التحضين جفف الغزل الفطري على درجة حرارة )25 22 ( م لمدة 0 ساعات يعاد التجفيف لمدة ساعة مرة أو أكثر حتى ثبات الوزن الجاف ]2[. 2.6 استخالص وتنقية المنتجات األيضية الثانوية لفطر.A fumigatus (0) تم حقن بيئات التخمر المضاف لها مستخلص الخميرة بحجم 50 ml بمعدل 0 6 جرثومة/ ml من العزلة الفطرية (0) Fumigatus A. في دوارق سعة 250 ml تحتوى على 50 ml وتحضن على درجة حرارة 30 م لمدة اسبوعين (4( يوما تحت ظروف ثابتة اجريت التجربة من 0 مكررات.]2[ 2.2.6 كروماتوغرافيا العمود: Chromatographie sur Colonne (CC) يسخدم عمود 0) x (2.5 cm يحتوي على اكسيد األلمنيوم (3 (Al 2O ويضاف اليه عينة المنتجات األيضية الثانوية الخام بعد اذابتها في 0 ml من البنزين يستقبل مستخلص البنزين النازل في حوجلة سعتها 500 ml والممثل في المنتجات األيضية الثانوية الخامة المجمعة على بعضها. 3.2.6 كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة: Chromatographie sur couche mince (CCM) جرى سريان للمواد األيضية الثانوية الخامة المجمعة على صفائح زجاجية من (F254 (Silicagel G بسمك 0.5 cm توضع الصفائح في المحلول العضوي الذواب والمتكون من: (5 : 4 : ) (Toluene - Ethyl Acetate - Acid Formique) )حجم / حجم / حجم( تقرأ النتائج بتعريض الصفائح األشعة فوق البنفسجية ذات الطول الموجي. = 365 nm النتائج والمناقشة من المشاهدة العينية تبدو مستعمرة عزالت.A fumigatus بشكل خيطي مسطحة وشفافة في األيام األولى من النمو لتتلون باألحمر خالل 0 إلى أيام وتصبح خضراء برونزية بعد ذلك. أما المالحظة المجهرية سمحت بمعرفة أن العزلة الفطرية تبدو بشكل هيفات ملساء متفرعة, تكون ميسليوم شفافا متشابكا يكون حامل كونيدي 7
م ل. دهيمات م.م. عطا هللا طويل ينتهي برأس منتفخة تتوضع عليها حويصالت Phialides متراصة ومتزاحمة تخرج منها أجسام صغيرة الحجم تعرف بالجراثيم.Spores هذه المالحظات سجلت من طرف عدد من الباحثين الذين أشتغلوا كثيرا على العزلة الفطرية.]0 0[ A. fumigatus شكل.)2( شكل )(: الحامل الكونيدي للعزلة الفطرية Aspergillus fumigatus تحت المجهر اإللكتروني )تكبير= 00( 8 الجراثيم Spores الفياليدات Phialides الرأس الكونيدية Tête conidienne الحامل الكونيدي Conidiophore أبدت الساللة Staphylococcus blanc حاسية شديدة ب -3) 5) mm تلتها كل من (,2) coli Escherichia ب (2.70 Pseudomonas - 4.20-4, على الترتيب 4.60) mm sp. ب (3-4.0) mm ثم السالالت البكتيرية: P. mérabilis, Protus vulgaris, klebseilla pneumonia (é), Bacillus subtilis, وأخيرا: S. épidermis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aerogenas. ومما تجدر اإلشارة إليه أن غالبية العزالت الفطرية لها أثير مباشر في تثبيط نمو مختلف السالالت البكتيرية الممرضة وغير الممرضة الموجبة والسالبة مع صبغة جرام. كما يمكن التنويه أن العزلتين (8,0) fumigatus.a كانا لهما األثر الواضح على تثبيط نمو السالالت البكتيرية المختلفة. هذا يتوافق وما أشار إليه ] 2[ ويذكر ][ أن التوزيع التكراري للفطر.A fumigatus سواء ممرض أو متطفل يوضح قدرته على إفراز السموم المثبطة لنمو البكتيريا الموجبة والسالبة مع صبغة جرام. كما أن الفطر معروف بقدرته المرضية العالية على النبات وبعض عزالته ممرضة لألنسان والحيوان ]6 [. تم معرفة مدى حساسية األنواع البكتيرية لتأثير اقراص تم تنمية العزالت الفطرية A. fumigatus (8,, 00, 0, 63, 64, 65( بقطر 5 mm من عزالت فطر على بيئات تخمرية مختلفة في محتواها من السكروز 65( (8,,00, 0, 63, 64, fumigatus A. النامية مستخلص الخميرة مسحوق كل من األرز الشعير أو على بيئة األجار المغذي لمدة 2 ساعة من التحضين على القمح وبعض العناصر المعدنية في بيئة Czapeck -Dox درجة حرارة 07 م تبين من الجدول (2) أن متوسط قطر السائلة عند 6= ph ودرجات حرارة ) 5 ن 0 ( م لمدة منطقة التثبيط يختلف من عزلة إلى أخرى بالنسبة للسالالت 2 يوم من التحضين تحت ظروف ساكنة لالختيار أنسب البكتيرية المختلفة ويتراوح ما بين (0-5). mm وسط غذائي تخمري يمكن تنمية العزالت الفطرية عليه أبدت الساللة sp. Acenitobacter مقاومة للمنتجات إلنتاج كتلة خلوية تعطي كمية األيضية لمختلف عزالت الفطر ب (0-3) mm تلتها معتبرة من المنتجات األيضية () pneumonia Klebsiella ب (.6-3) mm في حين الثانوية ومنه أحسن عزلة فطرية. متوسط قطر نمو عزالت فطر )mm(.a fumigatus أظهرت النتائج المسجلة في السالالت الميكروبية 63 62 63 2 8 الجدول )0( والشكل )( أن 00 ml 2 2 2 2.7 20. 2 2 2 Acenitobacter sp. من البيئة رقم 0 المحتوية على بيئة 20. 20.7 2.2 2. 2. 2. 2.6 2. bacillus subtilis Czapek- Dox بها 4g سكروز 2.6 2.5 2. 2.7 2.7 2.5 2.5 2.6 Escherichia coli () (2) coli 20. 20. 20. 2.7 20.2 2 2. 20. Escherichia مضافا لها 3g من مسحوق األرز () pneumonia 2 22.7 22.6 22. 2 2 22.6 20. Klebsiella وتعتبر كأحسن بيئة إلعطاء 2245 mg من الوزن الجاف للميسليوم 20. 2.0 2 20. 20. 2 2 2. Klebsiella pneumonia (2) 2 20. 2.5 2 2 2.7 2. 2. Proteus vulgaris وmg 6.8 من المنتجات األيضية 2 2 2 2 20. 2 20. 20.6 Proteus merabilis A. 20. 2. 2.6 2 2 20.6 20. الثانوية للعزلة الفطرية 20.5 Pseudomonas aerogenas sp..fumigatus (0) 20.7 2.2 20. 20.2 20.2 20. 20.7 2. Pseudomonas ليس بالضرورة 2 2 20. 20. 20.2 2 20. 20. Staphylococcus aureus أن أكبر كتلة خلوية تعطي أكبر 20.7 20. 20. 2. 2. 2. 2. 25. Staphylococcus blanc كمية من المنتجات األيضية الثانوية 20.6 20. 20. 2 20. 20.6 20. 20. Staphylococcus epidermis الخامة جدول 2: حساسية السالالت الميكروبية ألقراص قطرها 5mm من عزالت فطر Aspergillus fumigatus النامية على بيئة األجار المغذي )GN( لمدة 2 ساعة من التحضين على درجة حرارة. 07
استخالص وتنقية المنتجات األيضية الثانوية لفطر Aspergillus fumigatus ذات التأثير البيولوجي على بعض السالالت البكييرية... Toluene-Ethyl Acetate Acid formique )5 : :2( حجم/حجم/حجم بالطريقة المذكورة في الطرق والوسائل. بعد التجفيف حددت قيم معامل السريان R f لكل البقع الموجودة الناتجة. تبين من الجدول )( والشكل )0( أن نوعية وكمية المنتجات األيضية الثانوية المستخلصة تختلف تبعا للبيئات التخمرية وكذا العناصر الالزمة لإلنتاج تباين في قيم معامل تراوح بين R F السريان.)07-52( رقم البيئة 2 0 5 تركيز بيئة Czapeck السكروز اإلضافات التخمرية g/00ml -Dox 4.0 + 00ml/ مستخلص الخميرة 3g 4.0 + 00ml/ مسحوق األرز 3g 4.0 + 00ml/ مسحوق الشعير 4g 4.0 + 00ml/ مسحوق القمح 4g 4.0 + الوزن الجاف لميسليوم الفطر mg/00ml 25 22 5 06 600 وزن المنتجات األيضية للفطر mg/00ml 25.7 27.5 2.6 27. 2 جدول 3: اختيار أهم البيئات التخمرية التي أعطت كمية معتبرة من الكتلة الخلوية والمنتجات األيضية الثانوية لفطر( 0 ). Aspergillus fumigatus شكل) 2 (: أهم البيئات التخمرية التي أعطت كمية معتبرة من الكتلة الخلوية والمنتجات األيضية الثانوية لفطر (0) fumigatus.a. كما هو موضح في البيئة رقم 5 التي أسفرت فيها النتائج على 2633 mg من الكتلة الخلوية مقابل 8.2 mg من المنتجات األيضية الثانوية. إن السكروز كمصدر للكربون مع مسحوق األرز كمصدر للنيتروجين يؤديان إلى توفير العناصر االزمة والضرورية لنمو وتطور الفطر بصفة جيدة شكل )(. وهذه النتائج تتوافق إلى حد كبير مع ما أشار إليه كل من : ] 2 [. كما أن فطر.A fumigatus مثل باقي الفطريات يحتاج إلى عوامل عديدة لها التأثير البين على نموه ويعتبر الكربون واألزون من العناصر المغذية الضرورية والفعالة كما أن األمالح النعدنية وبعض الفيتامينات يمكنها أن تنشط نمو الفطر وهذا ما أشار إليه كل من ]2 2 27 26 2[. تعد انتهاء فترة التحضين لمدة 2 يوم من تنمية فطر.A (0) fumigatus على بيئات التخمر Czapeck -Dox ذات تراكيز معلومة من )سكرو مستخلص الخميرة مسحوق األرز مسحوق الشعير ومسحوق القمح( أجرى استخالص المنتجات األيضية الثانوية من كل بيئة تخمرية وتمت التنقية بالمذيبات العضوية كروماتوجرافيا العمود باستخدام عمود أكسيد األلومينيوم Al 2O 3 ثم كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة بالسريان على ألواح Silica gel F254 وباستخدام مخلوط المذيب الخصائص الفيزيائية للبقع معامل لون البقع تحت رقم السريان الضوء الموجة القصيرة الموجة الطويلة البقعة 365 nm 254 nm المرئي R f بنفسجي بني أصفر 52 2 بنفسجي باهت أصفر برتقالي 0 بنفسجي طوبي 2 0 بنفسجي باهت أصفر باهت.075 بنفسجي أزرق باهت.55 5 بنفسجي باهت أخضر.5 6 بنفسجي باهت طوبي.656 7 أخضر غامق أخضر مزرق أزرق.67 أسود بنفسجي 2 بني مصفر بنفسجي غامق بني أصفر 07 2 نقطة االنصهار 2 2 2 2 2 2 جدول )2(: قيم R f والخواص الفيزيائية للمنتجات األيضية الثانوية لفطر (0) fumigatus. Aspergillus شكل )3(: أوزان المنتجات األيضية الثانوية للعزلة الفطرية النامية على أنسب بيئات التخمر المختلف fumigatus(0).a. لون البقع عند مشاهدتها بمصباح األشعة فوق البنفسجية (UV) بطول الموجة القصيرة 254 nm تراوح بين )بني أصفر برتوقالي طوبي ن أصفر باهت أزرق باهت
ل. دهيمات م.م. عطا هللا أخضر أخضر مزرق بنفسجي( والطويلة 365 nm )بنفسجي بنفسجي باهت أخضر غامق بنفسجي غامق( أما في الضوء العادي ظهرت بعض البقع باأللوان )أصفر أزرق بني مصفر(. بناءا عليه حددت 2 مركبات مما يجدر التنويه إليه هو أن نقاط انصهار هذه المنتجات األيضية كانت كما يلي: )2-2 ( م بالنسبة للمركب )6( ) 2-2 ( م بالنسبة للمركب )2 7 2( 5 و ) 2-2 ( م بالنسبة للمركبات )0 (. لوحظ تداخل بين المركبات أثناء سريانها في العمود مما يدل على وجود تقارب بعضها في التركيب الكيميائي وهذا ما الحظه : ] 2[. يبين جدول )5( األوزان المختلفة للمنتجات األيضية الثانوية للعزلة الفطرية (0) fumigatus.a النامية على أنسب بيئات التخمر المختلفة ومنه يالحظ أن المنتجات األيضية الثانوية تواجدت بكميات متقاربة في بيئات التخمر المناسبة لنمو وتطور الفطر أي في البيئات التي أعطت أحسن النتائج. أما بعض المركبات )2 2( لوحظت بكميات معتبرة مقارنة بباقي المركبات عالوة على المركب )( الذي لوحظ وبكميات ضئيلة مع كل بيئات التخمر. وهذا يدل على مدى تأثير العناصر المغذية على النشاط األيضي للعزلة الفطرية وقدرتها على النمو والتطور. كما سجل وجود مركبات أو شوائب أخرى عالوة على المنتجات األيضية الثانوية المقصودة من البحث والتي سبق وأن درست من طرف ]2[. خاتمة يعتبر استخالص وتنقية المنتجات األيضية الثانوية من المصادر الميكروبية وخاصة الفطريات من الميادين التي يجب االهتمام بها أكثر فأكثر لما لها من تطبيقات علمية في مجاالت عدة طبية صناعية وزراعية. أن تنمية الفطريات على بيئات تخمرية طبيعية التركيب الكيميائي ذات فوائد عدة. أن النتائج المحصل عليها في بحثنا مشجعة للغاية مما يحفزنا على متابعة البحث خصوصا في تشخيص المنتجات األيضية الثانوية المستخلصة ومعرفة خصائصها وطبيعتها الكيميائية لتدخل مستقبال حيز االختبارات والتحاليل في مختلف الميادين. REFERENCES ] [ - Atalla M.M. and Dehimat L., Egypt. J. Appl. Sc. (5), (4), pp. 250-263. ] 2[ - Berger C.C., Mez W.G. and Selva H.M., Coll. Physicians, Sung. Univ. New-York., Antimicrob. Agents. Chemother. 45(4), (73), pp. 388-3. ] 3[ - Botton B., Breton A., Fevre M., Ph. Guy J., Larpent P. and Veau P., "Moisissures utiles et nuisibles: importance industrielle", Masson, (0), pp. 5-05. ] 2[ - Cahagnier F. and Mutton F.L., "Les mycotoxines: connaissances actuelles et risque pour la santé dans la chaîne alimentaire", (84), pp.3-45. ] 3[ - Carbonnelle B.F., Denis A., Marmonier G. and Rivargues P., "Bactériologie médicale: techniques usuelles", (87), pp. 224-243. ] 6[ - Clément N.L., J. Assoc. Annal. Chem., 5, (68), pp. 6-62. ] 7[ - Daguet G.L. and Charbbert Y.A., Antibiotique, (86), p. 230. ] 8[ - Davis N.D., Diener V.L. and Eluridj D.W., Appl. Microbiol., 4, (66), pp.378-380. ] [ - Dehimat L. and Atalla M.M., "Etude des mycotoxines de moisissures contaminant les céréales et légumes secs variées", thèse de magister (0), ISN, Univ. Constantine. ] [ - Domsch K.H., Gams W. and Anderson T.Y., "Compendium of fungi", Vol. I, Academic Press Publishers, London, New-York, Torento, Sydney, (80). ] [ - Dorothy E.T. and Christensen M.C., Mycologia, 78(3), (86), pp. 475-477. ] 2[ - Feriera N.P., Microbiological Aspect., (67), pp. 57-68. ] 3[ - Guiraud J. and Galzy P., "Analyses microbiologiques dans les industries alimentaires", Collection Génie Alimentaire, Les éditions de l usine, (80), p. 2. ] 2[ - Kieksy J.W. and Cole R.J., "Serming for toxin production fungi", Mycopathologia et Mycologia Application, 54, (74), pp. 2-26. ] 3[ - Korozybski T., Kowszyk G.Z. and Kurzlowiez W., "Antibiotics, origin, nature and properties", Pergaman, Oxford, (67). ] 6[ - Kurbatskaya Z.A., Int. Microbiol. Virusal, Kiev, (USSR), 38(3),(76a). pp. 2-302. ] 7[ - Kurbatskaya Z.A., Int. Microbiol. Virusal, Kiev, (USSR), 38(), (76b). p. 476. ] 8[ - Kurbatskaya Z.A. and IbraginovA.G., Int. Microbiol. Virusal, Kiev, (USSR), 4(4), (7), pp. 358-362. ] [ - Kurbatskaya Z.A. and Trosnetiskii A.A., Int. Microbiol. Virusal, Kiev, (USSR), 83(3), (86), pp. 5-54. ] 2[ - Lee Ung Soo, Jen Hyarg Suk, Tanaka Tochit Sugu, Toyaski Noritsume Yoschit, Sungn On Yan, Jincho Chamin and Treno Yochio, Appl. Environ. Microbiol., 52(6), (86), pp. 258-260. ] 2[ - Rao K.K., Ptel U.P. and Patel B., Fac. Sci. Mahajara, Soyajirora, Univ. Boroda, India, Indian. J. Exp. Biol., 5(7), (74), pp. 588-58. ] 22[ - Rapper K.B. and Fennel I.D., "The genes Aspergillus", William and Wilkinson, Baltimore, (65), p. 4743. ] 23[ - Richard Cole J., Jerry W., Kirksey Joe W., Dorner R., David M., Wilson J.C., Johanson J.R., Neil A. Buel, Games P., Springh Kuldip K., Chexal J.C., Richard Cox H., J. Agric. Food. Chem., 25 (4), (77), p. 4. ] 22[ - Shonura T., Ezoki N., Tsurworka T., Niwa T., J. Antibiot., 23, (70), pp. 55-6. ] 23[ - Smith D.F. and Lunech G.P., J. Dairy. Sci., 56, (73), pp. 828-82. ] 26[ - Thruston J.R., Cyewski S.J., Pier A.C. and Richard J.L., Amer. J. Vet. Res., 33, (72), p. 2. ] 27[ - Woo P.W.K., Dion H.W. and Bartz Q.R., "Butirosins β- aminoglucosside antibiotics III structures, Tetrahedron. Litt., (7), pp. 2625-2662. رقم البقعة أنسب بيئات التخمر المختلفة 3 2.2 2.0 2.2 2.0.7.5.6..0.2.0 20.5 2.0 2 27..7 A..7 3.5 2.0 2.2 2.2.7.6 26.2 2.6.5 2. 2.5 2.2.6.2. 20. 27.5 0.6.0 2.6.6.7. 2.5 2 25.7 0. RF 52 0 2.075.55.5.665.67 2 07 / / / 2 0 5 6 7 2 المجموع mg/00ml mg/00ml mg/00ml المنتج الخام مركبات أخرى جدول 3: أوزان المنتجات األيضية الثانوية للعزلة الفطرية (0) fumigatus النامية على أنسب بيئات التخمر المختلف. 0